补充粪肠球菌可增加斑节对虾肝胰腺的抗氧化和非特异性免疫活性，减少脂质过氧化，增强抗病能力，增加免疫相关基因的表达。
饲料中添加5%粪肠球菌可增加斑节对虾肝胰腺的抗氧化免疫活性
粪肠球菌维持动物肠道的生理活性，该菌属乳酸菌，(R8a)是一种能在动物肠道内发酵碳水化合物产生乳酸的细菌，粪肠球菌是动物肠道中常见的益生菌，也是一种容易在肠道内粘附和驻留的厌氧菌。农业大学近期研究以粪肠球菌（R8a）为研究对象，评估该益生菌对斑节对虾非特异性免疫基因表达、酶活性、抗病性和肠道细菌的影响。
一、研究方法：
1、为了进行这项研究，斑节对虾购自水产研究所，对虾初始平均体长为6.00±0.82cm，初始平均体重为1.54±0.67g。
2、每天将粪肠球菌以0%、2%和5%的比例混入480克饲料中。每天将所需重量的基础饲料铺在托盘上，然后用细雾喷雾器将菌悬液均匀地喷洒在颗粒上，以达到每组饲料所需的细菌载量。同时，将等量的无菌盐水喷洒到对照饲料中。最后，将大豆油（基础饲料重量的1%）喷洒到所有饲料中。将颗粒饲料在室温下干燥，然后密封在袋子中并在4°C下储存。
3、受实验斑节对虾被随机分为3组。每组设3个小组，每天饲喂6次（上午5:00、上午9:00、下午1:00、下午5:00、晚上9:00 和凌晨1:00）。每日总投喂量为虾体重的1%，实验周期约为28天。在实验的第0、14和28天收集用于分析的样品。
二、粪肠球菌对斑节对虾免疫力的影响
1、肝胰腺中的 SOD活性
如图1所示，投喂14天后，0%、2%和5%组对虾肝胰腺SOD活性较0天明显升高。同时，2%和5%组的SOD活性明显高于对照组（即0%组）。饲喂28天后，0%、2%和5%组对虾肝胰腺SOD活性较14天明显降低。第28天，2%组SOD活性明显低于0%和5%组。随着总体饲喂时间的增加，各组SOD活性的变化先增加后逐渐减少，说明饲喂粪肠球菌对虾肝胰腺SOD活性有明显影响。
图1：粪肠球菌对斑节对虾肝胰腺SOD活性的影响
2、肝胰腺中MDA含量
饲喂粪肠球菌14天后，0%、2%和5%组对虾肝胰腺中MDA含量较0天结果明显增加（图2）。对照组与两个实验组（包括2%组和5%组）MDA含量无明显差异，而5%组MDA明显高于2%组。当饲喂时间延长至28天时，0%组MDA水平与第14天无明显差异，而2%和5%组MDA水平均明显下降。同时，2%和5%组MDA水平明显低于对照组。总体而言，随着饲喂时间的推移，MDA水平与SOD活性表现出相似的趋势。事实证明，喂养粪肠球菌对虾肝胰腺MDA含量有明显影响。
图2：粪肠球菌对斑节对虾肝胰腺MDA水平的影响
3、肝胰腺中的T-AOC活性
饲养14天后，0%、2%和5%组斑节对虾样品的T-AOC活性较0天的结果明显增加。对照组的T-AOC活性与两个实验组没有差异。至第28天，0%、2%和5%组的T-AOC活性均明显下降，且两个实验组的T-AOC活性均明显高于对照组。上述结果表明，各组饲养周期中T-AOC活性的变化与SOD、MDA的变化相似。这也意味着饲喂粪肠球菌对虾肝胰腺中T-AOC活性有明显影响。此外，所提供的粪肠球菌能够明显提高虾的抗氧化能力。
4、虾肝胰腺中的ACP活性
饲喂14d后，ACP活性较0d明显增加。同时，对照组与实验组之间差异不明显。第28天，对照组ACP活性较第14天明显下降，2%组和5%组之间无明显差异。饲喂28天后，2%组和5%组ACP活性均明显高于对照组。总体而言，除2%组外，ACP活性随着饲喂时间的延长而增加，而其他组的ACP活性先增加后减少，表明饲喂粪肠球菌对ACP活性动态具有的正向影响。
5、对虾肝胰腺中免疫相关基因的表达
饲喂第0天各组TLR22、Dorsal、Lysozyme、Crustin、IMD和Relish表达均下调，组间差异无统计学意义。饲喂14天后,Dorsal表达量最高的是2%组,TLR22、Lysozyme、Crustin、IMD和Relish表达量最高的是5%组，但与其余组相比差异明显。饲喂28天后，5%组中TLR22、Dorsal、Lysozyme、Crustin、IMD和Relish的表达量最高。其中，TLR22、Crustin、IMD、Relish水平与其他组比较差异有统计学意义。
综上所述，给虾喂食粪肠球菌对免疫相关基因的表达有明显影响。具体来说，实验组中的基因表达最初增加，然后以时间依赖性方式减少。
6、感染检测
对虾攻击7天后的平均累积死亡率如图3所示。2%和5%组的平均累积死亡率明显低于对照组。但2%组与5%组之间无明显差异。这意味着在饲料中添加粪肠球菌可以明显降低虾的累积死亡率，并对抗病能力产生明显影响。
图3. 饲喂添加粪肠球菌的虾饲料，对虾的平均累积死亡率的影响
三、研究结论：
结果表明，补充粪肠球菌可增加斑节对虾肝胰腺的抗氧化和非特异性免疫活性，减少脂质过氧化，增强抗病能力，并增加与免疫相关的基因表达。基于这些发现，研究人员建议在饲料中添加5%屎肠球菌是最佳选择。
